Breve descrição do impacto dos agentes patógenos que afetam as pisciculturas

• Colummare ou “Sela” (nome devido à descoloração na base da nadadeira dorsal). Flavobacterium columnare.
• Enterobacteriosis, Edwardsiella ictaluri, Edwardsiella tarda. Bacterias Gram negativas, anaeróbicas facultativas. E. Ictaluri geralmente é um patógeno especifico de Catfish e E. tarda, além, de Catfish está associada a patologias de salmão, dourado e tilápia.
• Estreptococosis, Streptococcus agalactiae e scundariamente a S. Iniae em tilápias, em robalos a Streptococcus parauberis, em truta arco-íris Streptococcus constellatus. (Lactococcus garvieae). A estreptococosis pode provocar mortalidade significativa (>50%).
• Septicemia, Aeromonas hydrophila, bactéria que morfologicamente se assemelha aos membros da família Enterobacteriaceae, causa ulcerações severas e lesões necróticas na pele dos peixes.

- PCR (Polymerase Chain Reaction): Técnica baseada na replicação do DNA “in vitro” que consiste na amplificação (ou síntese) de um fragmento específico de DNA em branco (por exemplo uma seqüência do genoma de um vírus). Este processo se realiza em uma maquina chamada termociclador, a qual permite realizar ciclos de temperatura necessários para completar as diferentes etapas da reação de síntese:
1) A desnaturalização do DNA (é a chamada separação das cadeias de DNA),
2) A hibridização (ou união por complementaridade das bases nitrogenadas entre as cadeias de DNA) dos iniciadores (pequenas seqüência de DNA sintéticas) específicas da região do genoma a sintetizar, e
3) A polimerização (ou síntese) do fragmento específico de DNA branco a detectar. Este processo é repetido múltiplas vezes (30 a 40 vezes) permitindo a produção de milhões de cópias da seqüência buscada.
Este fragmento pode ser observado em um gel de agarose por eletroforeses, em seguida tem uma coloração com bromuro de ethideio e iluminação com raios ultravioleta. A presença de uma banda de tamanho esperado indica um resultado positivo.

Uma variante chamada nested-pcr consiste na realização de dois PCR sucessivos utilizando um jogo diferente de iniciadores específicos em cada uma das reações. Isto permite aumentar nível de sensibilidade do método de diagnóstico e aumentar a especificidade da detecção.
Outra variante é a chamada RT-PCR (Reverse transcription-PCR) é utilizada para a identificação de agentes patógenos cujo genoma é de RNA. Uma primeira etapa antes da PCR clássica consiste em converter um segmento ou a totalidade do genoma viral em DNA complementar (cDNA) o qual é utilizado como amostra na reação de PCR.

- LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification) é uma técnica inovadora baseada na amplificação de seqüências de DNA, mas que não requer de ciclos de temperatura como a PCR. A técnica emprega 4 jogos de iniciadores na mesma mistura da reação, o que aumenta o grau de especificidade, e a síntese do DNA se completa em uma só temperatura (reação isotérmica). O resultado se observa mediante a técnica de eletroforese como no caso da PCR. A identificação de uma reação positiva pode ser observada mediante a turbidez no tudo de reação ou mediante a medição de um agente fluorescente incorporado na reação.

- Real Time PCR é uma técnica de PCR que permite quantificar (determinar o numero de cópias) da seqüência de DNA branco a amostra analisada. O termociclador esta associado a um módulo óptico que analisa em tempo real o avanço da reação de PCR e transmite a informação a um computador onde se visualiza a quantidade de seqüências sintetizadas. Sendo assim, esta técnica não necessita de uma análise posterior por eletroforese. A reação é monitorada mediante ao uso de agentes fluorescentes que emitem uma fluorescência proporcional com a quantidade de seqüências produzidas. Isto permite obter dados que indicam a quantidade inicial da seqüência na amostra realizada. Esta técnica é muito utilizada para avaliar a expressão dos genes (por exemplo dos genes imunitários implicados na resistência a patógenos) e assim realizar uma seleção de animais acompanhados por marcadores moleculares, por exemplo em programas de melhoramento genético.